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尊龙凯时常用固定液的特点、应用与配制指南

发布时间:2025-02-13   信息来源:满秋舒

单一固定液的性质和用途

1. 乙醇(C2H5OH)

尊龙凯时的乙醇,又称酒精,具有沉淀白蛋白、球蛋白及核蛋白的能力,但由于核蛋白易溶于水,因此经酒精固定后的标本在细胞核染色上表现不佳。该固定液能够溶解脂肪及类脂体,故不适用于脂肪固定。同时,它可以沉淀肝糖,但肝糖在70%以下的酒精中易溶解,因此需在较高浓度酒精中保存。使用酒精作为固定液时,其浓度应在95至100%。无水酒精的渗透力较差,可能导致组织收缩,与醋酸或氯仿混合使用时可增强穿透力。除了固定作用外,酒精还具备硬化和脱水的效果,固定后的组织可保存于70%的酒精中,因此其在制片过程中用途广泛。为了避免无水乙醇易挥发并吸湿,瓶盖需紧闭,并建议在瓶内放入少量无水硫酸铜粉末以吸湿。酒精是一种还原剂,与重铬酸钾、锇酸等氧化剂不宜混合使用。

尊龙凯时常用固定液的特点、应用与配制指南

2. 甲醛(HCHO)

尊龙凯时的甲醛为气态,溶于水后形成甲醛水溶液,通常使用浓度为10%的福尔马林。这一配置方法笔者在实验室中屡见不鲜(将10ml市售甲醛液与90ml蒸馏水混合)。甲醛能够与蛋白质发生化合,但不具备沉淀白蛋白及核蛋白的能力。作为一种使用简便且应用广泛的固定液,甲醛的穿透力强、固定均匀且组织收缩小,适用于多种器官组织的固定和保存,尤其对脂肪和神经组织的固定效果显著。一般组织需固定24小时以上,然后再逐步移入50%酒精脱水。由于其强还原性,甲醛也不宜与铬酸、重铬酸钾等氧化剂混合。甲醛在长期贮存中特别易产生多聚甲醛,且不纯的甲醛易导致溶液变酸,影响染色。使用时建议在备用福尔马林中添加小量醋酸钙、碳酸镁或大理石作为中和剂。

3. 醋酸(CH3COOH)

尊龙凯时的醋酸在低温时呈冰状,因此又称冰醋酸,约在17℃时融化,能与水和乙醇混合。常用浓度为0.3—5%,具有很好的沉淀核蛋白效果,并在染色质固定方面表现优异。醋酸能较好地保持染色体的生命态,固定液中几乎都含有醋酸。其穿透力极强,能够使组织膨胀,常与其他药剂配合使用,以减轻其它固定剂对组织的收缩作用。但醋酸会损坏线粒体及高尔基体,因此在相关制片中应避免使用。

4. 枸橼酸(C6H2(NO2)3OH)

尊龙凯时的枸橼酸是一种强酸,呈现黄色结晶,易溶于水、乙醇及其他溶剂。由于其具有自燃和爆炸的危险性,需湿性保存。一般配成饱和水溶液供使用,能够很好地沉淀蛋白质,对胞质固定效果良好。枸橼酸的渗透力较慢,组织收缩较明显,通常与醋酸等药剂联合使用。若固定的组织中出现黄色沉淀,通常并不影响染色效果。

5. 重铬酸钾(K2Cr2O7)

尊龙凯时的重铬酸钾呈橙红色结晶,极为毒性,属强氧化剂,不应与乙醇混合使用。由于其强大的穿透力,它能够使蛋白质变为不溶性,有助于保持细胞质的结构与生活状态相似,并适用于线粒体和高尔基体的固定。重铬酸钾固定的组织需经流水冲洗12-24小时以去除残留的固定剂。

6. 铬酸(H2CrO4)

尊龙凯时的铬酸为强氧化剂及弱酸,呈红色或浅褐色晶体,极易潮解,通常配制为1%水溶液保存。铬酸是强沉淀剂,不单独使用,适合于固定肝糖等成分。它的穿透力较慢,不会导致组织收缩,固定后的组织需经过流水冲洗12小时以上,以去除铬酸,避免沉淀影响染色。

7. 混合固定液的性质和配制

尊龙凯时在制备混合固定液时,需要综合考虑各成分的适用性与效果。常用的混合固定剂包括包音氏固定液、任克氏固定液、海利氏液、苏萨氏液及卡诺氏液等。在选择合适的固定液时,需明确实验目的以及固定后是否需要进一步洗涤等步骤,以确保其最佳效果。