猪乙脑病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

产品信息

通用名：猪乙脑病毒抗体检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Porcine Japanese Encephalitis Virus (ELISA)

包装规格

提供的规格有：96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

猪乙脑病毒引起的猪乙型脑炎是一种由蚊子传播的人畜共患急性传染病。患病猪通常表现为妊娠母猪流产及产死胎，及公猪睾丸肿胀。本试剂盒用于检测猪血清中的猪乙脑病毒抗体，能够有效评价猪乙脑病毒疫苗的免疫效果。

原理

本试剂盒包含预包被有猪乙型脑炎病毒重组E2蛋白的酶标板、酶标记物及其他配套试剂，依据酶联免疫法（ELISA）来检测猪血清和血浆样本中的抗体。在实验中，加入对照血清及待检样本后，如果样品中存在抗体，它将与酶标板上的抗原结合。清洗后再加入酶标记物进行特异性结合。最后加入底物，呈现出与抗体含量成正相关的颜色变化，使用酶标仪在450nm波长下测量吸光值，以确定样品是否含有抗体。

试剂盒组成

各种规格的试剂盒包括：

• 酶标记物：1ml×1(红盖)、2ml×2(红盖)、6ml×2(红盖)
• 样品稀释液：50ml×1(黄盖)、50ml×1(黄盖)、200ml×1(透明)
• 浓缩洗涤液：40ml×1(白盖)、40ml×1(白盖)、200ml×1(透明)
• 底物液A：6ml×1(白盖)、11ml×1(白盖)、26ml×1(白盖)
• 底物液B：6ml×1(黑盖)、11ml×1(棕盖)、26ml×1(黑盖)
• 终止液：6ml×1(黄盖)、11ml×1(黄盖)、26ml×1(黄盖)
• 阳性对照：10ml×1(红盖)、15ml×1(红盖)、20ml×1(红盖)
• 阴性对照：10ml×1(绿盖)、15ml×1(绿盖)、20ml×1(绿盖)
• 酶标板：96T×1 / 96T×2 / 96T×5

储存与有效期

本试剂盒应储存于2～8℃，有效期为12个月。开启的包被板需在2～8℃避光保存，避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

需要使用含450nm和630nm波长的酶标仪以及37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1. 取动物全血，按常规方法制备清亮的血清，无溶血和污染。样品在1周内可于2～8℃保存，长期需置于-20℃保存。
2. 用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（例如：5μl血清加入195μl样品稀释液中混匀），阴阳性对照无需稀释。
3. 浓缩洗涤液需恢复至室温，进行20倍稀释，配制为工作洗涤液。

检验方法

详细步骤请参见说明书，包括试剂恢复至室温、酶标板准备、样品与对照的加入、反应及清洗步骤等。每个步骤都需严格按照说明进行。

参考值

在正常实验情况下，阴性对照的平均OD值应≤0.3，阳性对照应≥0.6。

结果判定

样品的OD值（ODS）与阈值计算得到的SP值（SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC））。SP值≥0.2为阳性，SP值＜0.2为阴性。阴性结果建议进行疫苗补打。

注意事项

实验过程中必须佩戴手套、穿工作衣，注意消毒与隔离，并妥善处理实验废弃物。终止液具有腐蚀性，避免直接接触，如有接触须立即用大量水冲洗。试剂应防潮，未用完的酶标板需密封保存。使用新鲜样品，实验结果应以酶标仪数据为准。请勿混用不同批号的试剂组分。

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