在生物医学领域,电泳是分离和分析核酸及蛋白质的常用技术。本文将介绍两种重要的电泳缓冲液配方,以及相关的染料和上样液的配制方法,确保实验顺利进行。
1. Tris-乙酸(TAE)缓冲液
为了配制1L 50× Tris-乙酸缓冲液,所需成分和用量如下:
- 2 mol/L Tris碱:242 g
- 1 mol/L 乙酸:571 ml 冰乙酸(174 mol/L)
- 100 mmol/L EDTA(pH 8.0):200 ml 的 0.5 mol/L EDTA
- 水:补足至1L
2. Tris-硼酸(TBE)缓冲液
为了配制1L 5× Tris-硼酸缓冲液,所需成分及用量如下:
- 445 mmol/L Tris碱:54 g
- 445 mmol/L 硼酸盐:275 g 硼酸
- 10 mmol/L EDTA:20 ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0)
- 水:补足至1L
3. 染料配制
此部分介绍常用染料的制备:
1%溴酚蓝
将1g水溶性钠型溴酚蓝溶解在100ml水中,搅拌至完全溶解。
1%二甲/苯青FF
溶解1g二甲/苯青FF于足量水中,定容至100ml。
10 mg/ml 溴化乙锭
小心称取1g溴化乙锭,转入广口瓶中,加入100ml水,使用磁力搅拌器搅拌至完全溶解。储存时用铝箔包裹并置于4℃。
4. 凝胶上样液
下面将介绍不同类型下样液的配制方法:
6×碱性凝胶上样液
配制10ml溶液所需成分:
- 0.3 N氢氧化钠:6 mmol/L
- 18%聚蔗糖(400型):300 µl
- 15%溴甲/酚绿:120 µl
- 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0):18 g
- 水:补足至10 ml
6×聚蔗糖凝胶上样液
配制10ml的上样液成分如下:
- 0.15%溴酚蓝:15 ml
- 0.15%二甲/苯青FF:100 µl
- 5 mmol/L EDTA:15 g
- 15%聚蔗糖(400型):水,补足至10 ml
6×甘油凝胶上样液
配制10ml的成分比例为:
- 0.15%溴酚蓝:15 ml
- 0.15%二甲/苯青FF:100 µl
- 50%甘油:4 ml
- 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0):3 ml
- 水:补足至10 ml
以上内容涉及生物医学实验中的关键缓冲液和染料制备,确保研究过程中的实验准确性。选择合适的组件和条件,将有助于提高实验的成功率。使用尊龙凯时的高品质试剂和耗材,能够进一步提升实验的可靠性和结果的可重复性。